蛋白质
一、分子组成: 1 、特别元素 N : 每 g 氮 =6.25g 蛋白质 基本组成单位: aa
NH2
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氨基酸: R-C-COOH
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H
①带 -OH 的 aa :丝、苏、酪、 (化学修饰)
②含疏基的 aa :半胱氨酸(酶的活性中心、有保护作用) (谷胱期太)
③酸性 aa :天冬氨酸、谷氨酸(带负电荷)
④碱性 aa :精、赖、组 (解离带正电荷)
二、 aa 的理化性质:
①两性解离: aa 的等电点( PI ) PH < PI ,解离为阳离子 PH=PI ,成为兼性离子,是电中性 PH > PI ,解离为阴离子 举例 PI1=4.0 PI2=7.8 的两种氨基的电泳分离时,分离液 PH 值介于两个之间
②茚三酮反应 570nm
③紫外吸收 280nm
三、 aa 的生理功能:
①多肽链、蛋白质的主键是肽键,其余为次级键
②多肽链有方向性,由 N 端 →C 端( α - 氨基, α - 羧基) 例:小肽 NH2- 精一天冬 - 甘 - 谷 -COOH 室全不同的肽链 NH2- 谷 - 甘 - 天冬 - 精 -COOH ③肽键平面: 四、蛋白质的分子结构
1 、一级结构 aa 的组成及排列顺序,最重要的结构,基因序例由遗传信息决定一级结构
2 、二级结构:一级结构折叠盘旋、表现为 α - 螺旋, β - 折叠 β - 转角 无规卷曲、除肽键以外的次级键:氢键。
3 、三级结构:特点为
( 1 )形状呈现椭圆形、球形
( 2 )空间维持的次级键主要为 疏水键、离子键、氢键、范得华力也参与
( 3 )使疏水集团位于内部,亲力 集团位于外部,使稳定存在于水中,折叠盘旋后形成数个结构域
4 、四级结构:两个(或以上)是有三级结构的多肽链组成的结构,即不同的 蛋白质的亚基,不是在三级结构的基础上盘旋而形成的对大部分蛋白质来源, 具有三级或四级结构才具有生物活性, 但并不是所有的有生物活性的蛋白质具有三级 (或以 上)的结构。
五、蛋白质的理化性质:
1 、 两性触离:兼性、同样有 PI
2 、 紫外线吸收:入 =280nm 有最大吸收值,测蛋白质含量
3 、 大分子物质
4 、 沉淀和变性次级键断裂,主键未断裂:蛋白质从溶液中析出来称为沉淀, Pr 在水中的 两个稳定因素:水合膜和表面电荷。强电解质 ( 如 Nacl) 可以抑制弱电触质触离也可以吸收弱 电触质的水、使之沉淀,即盐析
六、 Pr 的分离和纯化
1 、 利用分子量:分子筛、离心、透析变性后:①生物学活性丧失 ②对蛋白酶的敏感性增加,易被水解③对化学试剂反应性 ↑
2 、 利用电荷:电泳、层析、变性( denaturatcon ) - 不涉及 - 级洁构 变性的 pr 容易沉淀,沉淀的 pr 不一定是变性的。
区别 pr 变性和沉淀的方法:是沉淀而不是变性①盐析法②冰工醇 ( 丙酮 )-80 ℃
七、 pr 的功能和结构的关系 分子病 ——级结构发生改变影响其功能,如镰刀形 RBC